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PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案-资讯wiki版
来自 : 发布时间:2024-12-23
PCR产物的电泳检测时间,一般为48h以内,有些最好于当日进行检查,大于48h后带型不规则甚至消失。但有时仍会与到这样那样的问题,影响检测结果的判断,具体归类为以下常见的4点,描述如下:问题一:无扩增产物现象:正对照有条带,而样品则无。原因:1、模板:含有抑制物,含量低。2、Buffer对样品不合适。3、引物设计不当或者发生降解。4、反应条件:退火温度太高,延伸时间太短。对策:1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量。2、更换Buffer或调整浓度。3、重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物。4、降低退火温度、延长延伸时间。问题二:非特异性扩增现象:条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带。原因:1、引物特异性差。2、模板或引物浓度过高。3、酶量过多。4、Mg2+浓度偏高。5、退火温度偏低。6、循环次数过多。对策:1、重新设计引物或者使用巢式PCR。2、适当降低模板或引物浓度。3、适当减少酶......阅读全文
浅析微电泳仪应用5大注意事项

详述PCR仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪


双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法:针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行设计了两对引物,采用双重PCR同时扩增上述基因,用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质,在50cm×100μm i.d.涂壁毛细管中,于一1


浅析微电泳仪应用5大注意事项

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪


详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪


PCR扩增产物的克隆

实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性)。如果要求不高,PCR产物也可不加处理。如果使用Str


利用Mastercycler X50系列PCR独有的2D梯度实现高效的PCR条件...

利用Mastercycler X50系列PCR独有的2D梯度实现高效的PCR条件优化Ultimate PCR Optimization with Eppendorf Mastercycler® X50 2D-gradientArora Phang, Tim Schommartz,Eppe


近年来,数字PCR已取得了很大的进展,这在很大程度上要归因于商业化系统的开发,如QX200。这些技术进步似乎预示着一个转折点,更多的研究人员很快将能使用这种技术。这将推动新应用的开发,挖掘出数字PCR的全部潜能,并让科学家转向更强大的生物标志物研究,甚至单细胞分析。 2月底,Bi
PCR实用大全3

PCR经验总结(先声明,此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处,请信分子克隆)一、增加PCR的特异性1、primers design这是最重要的一步。理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件1)足够长,18-24bp,以保证特异性。当然不是说越长越好,太长的引


PCR Primers For Gene Expression Detection or Quantification

Why PrimerBank?PrimerBank is a public resource for PCR primers. These primers are designed for gene expression detection or quantification (real-time


384-well PCR实验方法

Beforehand.choose empirically the annealing temperature of primers;make sure you have enough PCR-plates, Q-covers and sealing tape;prepare the stocks:


PCR体系优化

PCR优化在PCR的优化开始阶段,应用新的DNA模板,引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法,其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和(或)增加目的DNA产物的产率。PCR扩增的疑难解析问题 解释 补救措施目的产物条带在两种阳性对照管与试验管内部呈现明显的非常


PCR技术的原理与方法(3)

PCR常见问题一.没有扩增产物1.循环温度:变性温度、退火温度2.引物设计3.DNA聚合酶活性4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)5、DNA样品二.非特异产物及电泳呈涂布状1.Mg


T载体克隆的DNA序列分析

实验目的: 了解常规DNA序列分析技术(Sanger双脱氧法)的原理及操作步骤。 实验原理: 在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和Gilbert(1977)发明的化学


详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪


浅析微电泳仪应用5大注意事项

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答 PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,


什么是PCR阴性?

举乙肝的例子来说:通过酶免的方法查乙肝两对半和通过荧光定量PCR的方法学查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身体不舒服或者正常体检(比如入职体检),他去看医生,临床医生怀疑他得了肝炎(肝炎有很多种比如病毒性肝炎,也就是病毒倾入他体内后由于人体的三道防线没能把病毒消灭掉,导致病毒在


pcr实用技巧

增加PCR的特异性:1. primers design这是最重要的一步。理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&


PCR检测方法(二)

3.实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不


荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验

差异显示聚合酶链反应(PCR) 可促进在诸多物种中与污染暴露相关的新分子标志物的鉴定。至今,已有多种差异显示方法被详细描述。这里,我们描述了一种改良的RNA 随机引物触发的 PCR 方 法(RNAarbitrarily primed PCR, RAP-PCR) , 主要涉及通过 罗 丹 明(rhod


PCR检测的那点事儿(一)

聚合酶链式反应(PCR技术)又称无细胞分子克隆法,它的鼎鼎大名在分子生物学领域可谓如雷贯耳,近年来无论是如日中天的精准医疗,还是稳步发展的基因诊断都离不开PCR技术这位“老母亲”。对于检验检测行业的小伙伴来说,PCR技术也绝对能够称得上是我们的“好帮手”了。尤其是致病菌检测、动物源性鉴定什么的,


QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400


PCR仪常见问题及解答

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以


如何鉴定转基因成分?

转基因生物(Genetically Modified Organism,简称 GMO),是利用现代分子生物学技术改变基因组构成的生物,而非传统的选择育种,一般包括转基因植物、 动物和微生物。转基因食品就是利用上述的转基因生物(包括植物、动物和微生物)加工而成的食品或食品添加剂。目前最受关注的绝大


PCR仪的基本原理与分类

简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定


湖北新冠病毒检测试剂可先用后申报 这81家企业已可提供

新型冠状病毒疫情日益严峻,武汉地区医护人员口罩、防护服、检测试剂等物资稀缺的新闻牵动每个国人的心。由于试剂缺乏,很多患者不能被第一时间确诊和收治,导致很多后续治疗工作推进缓慢。 1月25日下午,湖北召开新型肺炎疫情防控工作发布会。湖北省医保局副局长刘松林介绍,新型冠状病毒感染导致的肺炎,早诊断


整理的PCR资料.供大家分享.

PCR实验技巧增加PCR的特异性:1. prime理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60%c. 5 端和中间序列要多


dPCR推动精准医疗迅速发展

数字PCR简介 数字PCR(Digtal PCR)是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段,于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中,使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时,加入可检测荧光。待扩增结束时,使用统计学方法采集每个反应单元


一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法(一)

为了促进斑马鱼的高通量的基因分型,我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析(HRMA)区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高,可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基


ABIVeriti――真正意义上的温度梯度PCR仪

ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。Veriti系出名门,秉承了一贯的可靠性,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。 温度梯度PCR仪进展 温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercyc

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发布于 : 2024-12-23 阅读()